HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計算?

　　各位小伙伴都聽說過死體積吧。死體積越大，導致樣品擴散的空間很大，色譜峰會更容易展寬，峰形變差。那么死體積該如何定義呢，死體積大小如何計算，這里小編就給各位小伙伴做個介紹。
 

　　死體積的定義：
 

　　死體積狹義上指的是Hamilton 離子排斥色譜柱中未被固定相占據的空隙體積，即色譜柱內流動相的體積。廣義上的死體積是指進樣位置(進樣口)到檢測位置(檢測器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積)，一旦色譜柱連接，這段體積(圖示橙色管路)是不變的(死的)。
 

　　HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計算?
 

　　死體積(dead volume,V0)——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據的空間。它包括4部分：進樣器至色譜柱管路體積、柱內固定相顆粒間隙(被流動相占據，Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展，這3部分體積應盡量減小。
 

　　死時間(dead time,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。
 

　　測量系統死體積通常需要通過實驗進行測量，常用方法是通過進一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會有規定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液，也有直接用*色譜純甲醇進樣的情形)時，就會得到一個色譜峰，由此峰可以測得死時間(t0)，這就是t0的實測結果。
 

　　然后通過計算得到系統死體積：
 

　　死體積(V0) = 死時間t0×流動相的流速F。
 

　　減小死體積的注意事項：
 

　　在我們使用或維護的過程中，如果涉及管路等配件的更換，應該選擇與原規格一致的配件，以確保死體積與原來一致，避免死體積的增加而帶來峰形的展寬。
 

　　接裝色譜柱時，需確保管線接頭匹配完好(特別注意peek管接頭的使用，以及管線與色譜柱的連接處)避免形成接頭空腔.